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酶標儀在各個領域中的重要作用
點擊次數：5168 更新時間：2016-05-25
 　　自七十年代酶標法提出以來，經過不斷地發(fā)展現已成為檢驗某些指標的主要方法，與此同時，作為于微孔板比色的酶標儀也獲得了很大的發(fā)展。

　　1、酶標儀在血液檢驗上的應用

　　目前在國內血站臨床試驗室中，酶聯免疫吸附試驗已成為主要的免疫測定技術，由于大部分ELISA后以比色測定，使酶標儀成其它各類型酶標儀為ELISA測定的重要工具。八十年代初，當酶免疫測定技術從國外引進時，基本上均使用肉眼判斷結果，難以滿足臨床測定要求。目前國內醫(yī)院和血站實驗室所使用的酶標儀絕大部分為進口儀器，品種型號多達數十種。

　　軟件功能是酶標儀所具有的對 ELISA定性和定量測定及其他測定方式如酶動力學、紫外、凝集等的統計分析并報告結果的功能，是判斷酶標儀質量的一個指標。ELISA 測定，酶標儀需具有陽性判斷值(Cutoff)及測定灰區(qū)的統計計算功能，如血站實驗室篩選獻血員進行抗 - HCV、HBSAG、抗 - HIV 測定時，常遇到測定吸光度處于Cutoff 附近，但又低于Cutoff 的樣品，這樣的血輸給患者導致輸血后傳染疾病的可能性增大。若設定灰區(qū)，以灰區(qū)下限作為判斷標準，可減少輸血后傳染疾病的可能性。此外四參數測定的劑量反應曲線適合于定量酶免疫測定曲線的擬合。因此，如果目的為定量測定，要有這種曲線回歸方程計算分析功能。其他如連點、直線等回歸計算，可根據酶標儀的應用目的而定。

　　丙氨酸氨基轉移酶(ALT)的測定，是對獻血者*的篩查項目之一。方法上有速率法和賴氏法等。若采用賴氏試管法，費工、費時，不但從方法上得不到統一，而且不利于計算機對原始數據的網絡化管理。若采用微板酶標儀定量(U/L)方法，利用酶標儀與計算機接口，聯接血站局域網絡，這就同其他酶法檢測項目一樣，實現了實驗室原始數據的計算機管理。

　　采用試管法檢測Rh血型，操作繁鎖，肉眼判讀結果缺乏客觀性。故將平底微板法與酶標儀掃描，電腦自動判讀打印技術相結合，用TCEAN全自動加樣分析系統完成。經常規(guī)13032份標本的檢測，符合率達100%。利用酶標儀法檢測Rh血型具有較好的重復性、準確性，操作簡便快速、判讀結果客觀可靠，也易于原始結果的保存，提高自動化程度，能的篩選獻血者，有利于實驗室的標準化管理，也有利于血站稀有血型庫的建立。

　　2、酶標儀在農業(yè)上的應用

　　在自然界中，無論是脊椎動物還是無脊椎動物(包括昆蟲)、植物或微生物，酚氧化酶在其生命過程中都發(fā)揮著重要作用。在昆蟲體內，它對昆蟲的變態(tài)發(fā)育和免疫系統起著重要作用。酚氧化酶催化完成的“醌鞣化”作用可以促進昆蟲表皮的硬化與黑化，這個過程對于具有“外骨骼”的昆蟲生命過程關重要。因此酚氧化酶抑制劑的研究正是為當今農藥的發(fā)展提供了重要線索。那么采用何種、簡便的的方法來研究酚氧化酶抑制劑對酚氧化酶的影響?我們可以運用酶標儀微量法來進行這方面的研究。例如以LDOPA 為底物，采用酶標儀微量法研究了化合物2-羥基-4-甲氧基苯甲醛縮苯胺對酚氧化酶的影響。利用酶標儀旨在為酚氧化酶研究提供更便捷的方法，也為開發(fā)以該酶為靶標的新型害蟲控制劑提供理論依據。

　　3、酶標儀在食品安全方面的應用

　　伏馬菌素是近發(fā)現的一族主要由幾種真菌產生的結構相關的毒素代謝產物，主要包括FB1，FB2和FB3。FI能引起馬腦白質軟化癥，豬肺水腫及大鼠腎及肝癌。流行病學研究顯示部分地區(qū)食道癌的高發(fā)率與玉米中含伏馬菌素(1.0-2.0mg/kg)有關。毒物學研究表明少量的FB2和FB3的潛在的致癌作用與FBl類似。癌癥研究機構與加利福尼亞環(huán)境保護機構已宣布伏馬菌素為人類潛在的致癌物質。該毒素已被世界衛(wèi)生組織列為近年來行研究的幾種霉菌毒素之一。因此快速、的檢測伏馬菌素便顯得尤為重要，應用固相直接競爭酶聯免疫吸附原理，用70%甲醇從研磨樣品中提取伏馬菌素。萃取出的樣品液與酶標記的伏馬菌素混合加入到抗體包被的微孔中，樣品及標準品中的伏馬菌素與酶聯偶合劑競爭結合孔中的特異抗體。經過洗滌步驟后，當酶的底物被加入到微孔中，顏色變?yōu)樗{色，且顏色深淺與樣品中伏馬菌素含量成反比。加入反應終止液終止反應后，顏色應由藍色轉為黃色。在450nm或630nm的濾鏡下使用酶標儀對微孔板進行光學測量。將樣品與標準品的光密度值進行比較后確定得出的結果。

　　4、酶標儀在微生物學的應用

　　生長曲線一般指菌落總數CFU/mI?；蛘呔淇倲档膶祃og CFU/ml。隨時間變化曲線，可用來展示微生物生長情況和新陳代謝規(guī)律。由于受試菌數量/濃度與菌懸液的光學密度(optical density，OD)值成正比，所以生長曲線也常用OD-t曲線表示。目前菌懸液OD值主要通過可見分光光度計測定，其在評價微生物生長狀態(tài)時可以得到滿意的結果。但是該方法存在一定缺點：即時性差;需反復采樣，操作繁瑣;取樣和檢測過程中培養(yǎng)基容易感染雜菌;作為懸濁液，細菌有一定的沉降速率，檢測時間的長短會對OD值產生影響，導致實驗再現較為困難。由于酶標儀是一種快速、準確、高通量的儀器，所以我們總會選擇使用酶標儀來進行菌懸液OD值的測定，來提高工作效率，節(jié)約時間。

　　除測定菌懸液OD值外，酶標儀還可用來檢測細菌濃度。例如：各類紡織品與人類生活關系密切，其表面附著的微生物可能是疾病傳播的重要媒介或與體表微生物相伴形成一種有機的微生態(tài)關系。隨著時代的發(fā)展，各種抗菌織物產品不斷出現，但對評價抗菌紡織品的

　　抑菌效果尚無規(guī)范的方法，所以，建立一種科學評價織品抗菌效果的方法對衛(wèi)生微生物學和微生態(tài)學研究均具有重要價值。由于活菌計數誤差較大而且工作繁瑣，不適用于大批量標本的檢測，因而利用酶標儀檢測細菌濃度便可建立檢測織品抑菌效果的有效方法。

　　5、酶標儀室內質量控制

　　酶標儀是臨床檢驗科和血站常用的免疫學檢測儀器之一，它通過吸光度測定，對被檢標本作出定性或定量報告，但影響其測定結果的因素較多，而現有的血清學質控方法是對免疫學檢驗的全過程進行質量控制，包括加樣、保溫、洗滌、顯色、終止和比色等步驟，一旦出現失控，很難判斷是試劑的原因、儀器的原因或是操作人員本身的因素，為了明確地了解儀器的工作狀態(tài)，我們建立了一種酶標儀室內質量控制方法。如這種簡單的酶標儀室內質量控制方法，它采用甲基橙溶液作為質控物，用質控圖法對酶標儀492nm波長進行質控，其結果不受免疫檢驗過程中加樣、保溫、洗滌、顯色、終止和比色等步驟的影響，可直接反映儀器本身的性能，方法簡單、效果良好。